多光子激光掃描顯微鏡的優點及缺點
多光子激光掃描顯微鏡是建立在激光掃描顯微鏡技術基礎上的實驗方法,在三維觀察上提供了更優良的光學切片能力。多光子熒光激發方法使用長波長的紅光或近紅外光采集標本高分辨率熒光圖像,對活性標本的殺傷極小,因此適用于活細胞成像,尤其是厚的活組織如腦片、胚胎、整個器官甚至整個機體的成像研究。
優點如下:
1、利用紅光或紅外光激發,光散射小(小粒子的散射與波長的四次方的成反比)。
2、不需要針孔,能更多的收集來自成像截面的散射光子。
3、針孔不能區分由離焦區域或焦點區發射出的散射光子,多光子在深層成像信噪比好。
4、單光子激發所用的紫外或可見光在光束到達焦平面之前易被樣品吸收而衰減,不易對深層激發。
5、在生物顯微鏡觀察方面,*先考慮的是不損壞生物本身的活性狀態,維持水分、離子濃度、氧和養分的流通。在光觀察場合,無論是熱還是光子能量方面都必須停留在細胞不受損傷的照射量、光能量內。
6、多光子顯微鏡還具有很多優點。如三維分辨率、深度侵入、在散射效率、背景光、信噪比、控制等方面,有以往激光顯微鏡不具備或具有無法比擬的超越特性。
多光子共焦激光掃描顯微鏡已延伸到各個研究和應用領域.,它能對處在自然狀態下的樣品進行三維無損觀察 ,并能提高系統的分辨率和信噪比.利用多光子激發后材料性質的變化 ,還可以實現三維高度數據存儲和三維任意方向的微細加工 ,具有很高的應用價值. 可以相信 ,隨著與多光子共焦顯微鏡相關的機械、材料、激光技術等的進一步發展 多光子共焦激光掃描顯微鏡將得到更大的發展和更廣泛的應用.
缺點如下:
1、只能對熒光成像。
2、如果樣品包括能夠吸收激發光的色團,如色素,樣品可能受到熱損傷。
3、分辨率略有降低,雖然可以通過同時利用共焦的小孔得到改善,但是信號會有損耗。
4、受昂貴的超快激光器限制, 多光子掃描顯微鏡的成本較高。