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激光掃描多光子顯微鏡的改進優勢
激光掃描多光子顯微鏡
的改進優勢
激光掃描多光子顯微鏡
是光學顯微鏡的重大改進,主要表現為可以觀察活細胞、固定細胞和組織的深層結構,并且可以得到清晰銳利的多層Z平面結構,即光學切片,并以此可以構建出標本的三維實體結構。共聚焦顯微鏡是采用激光光源,經過擴充后充滿整個物鏡后焦平面,然后經過物鏡的透鏡系統,在標本的焦平面上會聚成非常小的點。根據物鏡數值孔徑不同,*亮照明點直徑大小約0.25 ~ 0.8μm,深度約0.5 ~ 1.5μm。共聚焦點大小決定于顯微鏡設計、激光波長、物鏡特性、掃描單元狀態設定和標本性質。場式顯微鏡的照明范圍和照明深度都很大,而共聚焦顯微鏡的照明則集中到焦平面上的一個**的焦點上。共聚焦顯微鏡*基本的優點是可以對厚熒光標本(可以達到50 μm或以上)進行精細的光學切片,切片的厚度約為0.5到1.5μm。系列光學切片圖像可以通過**的顯微鏡Z軸步進馬達上下移動標本獲得。圖像信息的采集被控制在**的平面內,而不會被位于標本上其他位置發出的信號干擾。在去除背景熒光影響和增加信噪比后,共聚焦圖像的對比度和分辨率比傳統場式照明熒光圖像有明顯的提高。在很多標本中,許多錯綜的結構成分相互交織構成復雜的系統,但是一旦能夠采集到足夠的光學切片,我們就能通過軟件對其進行三維重建。這種實驗方法已經被廣泛應用于生物學研究中,用來闡明細胞或組織之間復雜的結構和功能關系。
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